冷冻干燥机在生物制品大肠杆菌噬菌体的冻干保存

2019-03-07 11:27:05 tfsye 32

冷冻干燥机在生物制品大肠杆菌噬菌体的冻干保存,在4%的湿度条件下完成,包括以下步骤:
  1) 大肠杆菌噬菌体溶液于2℃静置4h,出现絮状沉淀,经过8000r/min离心40min;
  2) 向上述沉淀中加入噬菌体缓冲液,将沉淀溶解,得噬菌体液;所述噬菌体缓冲液 以重量组分计,包括以下组分:三羟甲基氨基甲烷盐酸盐8份、氯化钠0.05份、氯化钾1份、硫 酸镁5份、磷酸氢二钾1份、磷酸二氢钠8份、明胶0.05份和去离子水100份,并且使用稀盐酸 和/或氢氧化钠调节pH到7;
  3) 噬菌体液等体积的噬菌体保存保护剂混合均匀,所述噬菌体保存保护剂所述氨 基酸以重量组分计,包括以下组分:5%蔗糖脱脂乳6份、硅藻土 0.3份、木糖醇2份、DEAE-葡 聚糖〇. 8份、阿拉伯胶0.01份、牛血清白蛋白0.7份、麦芽糖糊精0.05份、蜂蜜0.01份、棉子糖 0.8份、磷酸铝0.03份、氯化钠0.01份、硫酸镁0.3份、氯化钙0.6份、20%甘油1份、阿拉西A0.05份、防腐剂尼泊金乙酯0.01份和去离子水100份;
  4) 预降温:将上述混合溶液冷冻降温至5℃,并保持30min;进一步以1℃/min的速 度降温到-5℃,并保持30min;再进一步以rC/min的速度降温到-30℃,并保持lh;
     一级干燥:将上述溶液于-30℃、80mTorr压强的真空条件下干燥12h;二级干燥:以 0. rC/min的速度,加热上述溶液到25℃,再于上述真空条件下保持4h后得噬菌体冻干粉;
  5) 噬菌体冻干粉在无菌条件下密封于安瓿中保存,所述安瓿放入装有无水氯 化钙的密封容器中于2℃保存。

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