冷冻干燥机在精子表面GPI-APs鉴定的作用

2017-10-13 10:37:59 冷冻干燥机 8

        冷冻干燥机在精子表面GPI-APs鉴定的作用,精子表面糖基化磷脂酰肌醇( GPI) -锚定蛋白( APs) 是一类通过羧基末端的糖基化磷脂酰肌醇锚定在细胞表面而不跨越膜磷脂双层的细胞膜蛋白,而 嗜水气单胞菌毒素( aerolysin) 是由革兰氏阴性嗜水性气单胞菌分泌的外毒素,能与GPI 锚蛋白的 GPI 锚基和 N-glycan 的多糖核心特异性结合,可以作为生物探针来鉴定精子表面的GPI锚定蛋白。实验依次进行了嗜水气单胞菌培养、毒素提取提纯、多克隆抗体制备以及三明治蛋白印迹验证实验。其中菌种冻干上,冷冻干燥机起到了关键性作用。

毒素制备———菌株复苏与扩大培养

  无菌吸管吸取0.3 ~0.5 mL 营养肉汤加入到装有真空冷冻干燥的菌种安瓿管内,冻干菌株溶解呈悬浮状. 吸取全部菌体悬液,移植于斜面培养基中,30℃培养箱中培养36h 后,挑取乳白色菌苔用连续分区划线法接种至培养皿中,继续培养24 h. 挑取培养皿中单个菌落,研磨法接种于盛有5 mL LB 肉汤培养基的50 mL灭菌离心管中,在30℃恒温振荡器中( 150 r/ min) 培养12 h 后倒入 250 mL LB 肉汤培养基,继续培养 36 h,菌液离心3 000 r/min,15 min,上清回收待用.


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