细菌冷冻干燥机操作

2019-04-29 11:05:55 tfsye 43

    细菌冷冻干燥机顾名思义是一种用于细菌、菌种、微生物等冻干保存的真空冷冻干燥机,也常常被称为细菌冻干机、菌种冷冻干燥机、微生物冷冻干燥机。其操作步骤如下:

一、菌株准备及分装

    液体培养的菌种,经离心收集和用生理盐水洗涤细胞,收集的菌体用保护剂(10ml脱脂牛奶中加1g米孢子粒)悬浮制成菌悬浮液。悬液中菌数要求达到108-1010个/ml为宜。悬液制备完成尽快分装和冻结。分装安瓿时可用灭菌长嘴毛吸管或长针注射器,每管分装量约0.1-0.2ml(0.3-0.5ml,单管式冷冻管球形装液区内的装液量应为球体积的一半左右),分装安瓿管时间尽量要短,最好在1-2小时内分装完毕并且预冻,分装时应注意在无菌条件下操作。

二、预冻

    置于-80℃超低温冰箱预冻1-2小时(也可直接选购-80℃低温实验室冷冻干燥机)。

三、 冷冻干燥

1. 将冷冻后的样品安瓿管置于细菌冷冻干燥机上(先开机预冷30分钟以上才开泵),开始冷冻干燥,时间一般为数小时。终止干燥时间应该根据以下情况判断:安瓿管内冻干物呈酥块状或者松散状;真空度接近空载时的最高值;选用1-2支对照管,其水份与菌悬液同量,视为干燥完结。(注意:确认干燥后,要先开启冷冻室的进气阀,让真空释放,然后停泵,打开冷冻室,将冷冻干燥管取出。)

2. 真空封口

将安瓿管颈部棉塞以下处用强火焰拉细进行熔封。

四、 保藏

   安瓿管保藏在-20℃超低温冰箱中。

五、 活化

    如果要从中取出菌种恢复培养,可先用75%酒精将管得外壁消毒,用无菌棉签沾冷水,在顶部擦一圈,顶部出现裂纹,用挫刀或镊子颈部轻叩一下,敲下已开裂的安瓿管的顶端,,在安瓿管中加入0.5-1ml液体培养基,慢慢旋转安瓿管,使冻干菌种复苏,然后直接接种到琼脂斜面或涂布平板。

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